ILの血清濃度

BMC Women's Health volume 23、記事番号: 253 (2023) この記事を引用

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メトリクスの詳細

子宮内膜症は、子宮腔の外側の他の部位に活動性の異所性子宮内膜腺および間質が存在することです。 これは、時には衰弱を引き起こす慢性骨盤痛の一般的な原因であり、炎症は子宮内膜症の既知の引き金の 1 つです。 インターロイキン 6 および 16 (IL-6 および IL-16) は、炎症性疾患において重要な役割を果たす炎症誘発性サイトカインです。 そこで我々は、ナイジェリア人女性におけるインターロイキン 6 および 16 の遺伝子多型と子宮内膜症の発症との関係を調査しました。

130 人の同意した女性が連続して登録され、そのうち 65 人が子宮内膜症を患っており、子宮内膜症ではないことが外科的に確認された年齢が一致する女性 65 人が参照グループとして登録されました。 インターロイキン 6 および 16 の血清濃度の分光光度測定を実行し、TaqMan アッセイを使用して IL-6 (rs1800795) および IL-16 (rs4778889、rs11556218、rs4072111) 遺伝子の遺伝子型決定を実行しました。

血清 IL-16 濃度は、軽度の痛みを持つ女性と比較して、重度の慢性骨盤痛を持つ女性の方が有意に高かった (p = 0.023)。 rs4778889 の C 対立遺伝子は子宮内膜症と関連していました (OR: 1.80、95% CI: 1.08 – 3.02、p = 0.024)。

血清 IL-16 および IL-16 rs4778889 は、ナイジェリア人、ひいてはアフリカ人女性の子宮内膜症の重要なマーカーである可能性があります。 アフリカの多施設研究がこれを明らかにするでしょう。

査読レポート

• インターロイキンは、痛みの経路において重要な役割を果たします。

• 血清インターロイキン濃度の変化は、変形性関節症、心筋梗塞、クローン病などの痛みを症状とするいくつかの臨床症状と関連していることがいくつかの研究で判明しています。

• 痛みは子宮内膜症の一般的な症状です。

• 子宮内膜症はインターロイキン遺伝子の多型と関連していますが、報告は矛盾しています。

• IL-16 のマイナー対立遺伝子「C」（rs4778889）は、ナイジェリアの子宮内膜症女性の子宮内膜症と関連しています。

• 子宮内膜症の女性の血清 IL-16 濃度と痛みの重症度との間には関連性があります。

子宮内膜症は、子宮腔の外側の他の部位に活動性の異所性子宮内膜腺および間質が存在することを特徴としています。 これは一般的な症状であり、影響を受けた女性の最大 71% が通常、慢性骨盤痛や月経困難症などの痛みに関連した症状を報告しています [1]。 女性の 30 ～ 50% で不妊症の素因となる可能性があります [2]。 診断はしばしば困難を伴い、多くの症例は診断が遅れます[3]。 さまざまな側面に関して多数の研究が行われているにもかかわらず、子宮内膜症の特徴は依然として管理が困難です[4、5]。

炎症誘発性マーカー、自己免疫および免疫調節因子としてのインターロイキンの役割は、子宮内膜症の発症におけるそれらの効果の探求につながりました。 いくつかの炎症誘発性サイトカイン、すなわちインターロイキン 1、6、10、16、腫瘍壊死因子-α、およびプロスタグランジン E は、子宮内膜症の発症に役割を果たしていると仮定されています [6、7、8]。

IL-6 は、炎症促進性と抗炎症性の両方の特性を持つ多機能サイトカインです。 これは、活性化マクロファージ、単球、線維芽細胞、活性化 T リンパ球および B リンパ球、内皮細胞などのさまざまな種類の細胞によって産生されます。 IL-6 は、脂質代謝、ミトコンドリア活性、神経内分泌系機能、神経心理学的行動などの細胞プロセスの恒常性の制御に関与しています [9]。 比較的、IL-6 は通常の条件下では低レベルを示しますが、イベントが免疫応答を刺激すると上昇します。 いくつかの研究では、IL-6 が子宮内膜症の疾患進行の優れたマーカーであることが示唆されています [10、11]。

IL-6 遺伝子は染色体 7p21-24 に位置し、6 つのエクソンと 5 つのイントロンで構成されています。 rs1800795 (-174G > C) は、IL-6 のプロモーター遺伝子に共通する機能的 SNP であり、転写活性と IL-6 濃度に影響を与えることが知られています [12、13]。

リンパ球化学誘引因子としても知られるインターロイキン 16 (IL-16) は、多くの免疫および炎症反応において重要な役割を果たす多機能炎症誘発性サイトカインです。 IL-16 は、末梢血単核細胞を介して、IL-6、IL-1β、TNF-α などの炎症誘発性サイトカインの産生を刺激し、これらは子宮内膜症の病因に重要な役割を果たすことが実証されています [14]。 古賀ら。 は、子宮内膜症患者の腹水中のIL-16濃度の上昇を示し、それが腹腔内での炎症反応の開始または持続に役割を果たしている可能性があることを明らかにしました。

IL-16をコードする遺伝子は、7つのエクソンと6つのイントロンからなるヒトゲノムの染色体15q26.3にマッピングされています。 IL-16 は 631 アミノ酸の前駆体タンパク質である Pro-IL-16 として存在し、カスパーゼ-3 によって切断されて、121 アミノ酸からなる機能的に活性な C 末端ドメインが放出されます [15、16]。 IL-16 の 3 つの一般的な一塩基多型 (rs4778889 T/C、rs11556218 T/G、および rs4072111) は、喘息、クローン病、癌、虚血性脳卒中などの炎症性疾患と関連していることが判明しています [17、18、19、 20]。 中国人女性を対象に実施された研究では、rs4778889 T/C多型の遺伝子型と対立遺伝子頻度が子宮内膜症と疼痛表現型に関連していた[21]。

子宮内膜症の女性のインターロイキン 6 および 16 の遺伝子多型については多くの研究が行われてきましたが、アフリカにおける良性の婦人科疾患に関する遺伝子研究の希少性を考慮すると、我々の知る限りではアフリカで初めて行われるこの研究は、必需品です。

この研究は、子宮内膜症の女性におけるIL-6およびIL-16の血清濃度を測定し、インターロイキン6（rs1800795G/C）および16（rs4072111C/T、rs11556218T/G、rs4778889T/C）の​​遺伝子多型が関連しているかどうかを調査することを目的としています。ナイジェリア人女性における子宮内膜症および子宮内膜症関連の症状を伴う。

これは、ナイジェリアのラゴス、イディアラバにあるラゴス大学医学部/ラゴス大学教育病院（LUTH）の産科婦人科で、2019年10月から2021年6月まで実施された症例対照研究でした。

腹腔鏡検査、開腹術、組織学によって子宮内膜症と診断された、または子宮内膜症の治療に対する反応の臨床的証拠を示した同意のある女性全員が症例として募集された。 他の良性婦人科疾患のために腹腔鏡検査または開腹術を受けたことがあるが、手術時に子宮内膜症の証拠がなかった、年齢が一致する女性を参照グループとして採用した。 診断が疑わしい女性、腺筋症、癌、腎臓病、心血管疾患、糖尿病、慢性感染症などの慢性疾患を患っている女性は研究から除外された。

参加者の情報は、この研究用に設計されたプロフォーマを使用して、直接の質問または症例メモから収集されました。 得られた情報には、出生数、症状、子宮内膜症やその他の遺伝性疾患の家族歴などが含まれます。 症状として慢性骨盤痛を報告した人の痛みの評価には、数値評価スケールが使用されました。 疼痛スコアは、0 ～ 5 軽度、6 ～ 7 中等度、8 ～ 10 重度に分類されました [22]。 この研究では、腹水を、腹部の打診による鈍感の変化によって臨床的に証明できる腹腔内の体液の蓄積、または腹部穿刺または他の外科的処置中に排出された500ml以上の腹膜液の蓄積と定義しました[23、24]。 静脈穿刺により各参加者から 4 ミリリットルの末梢血を採取しました。 採取した血液サンプルは分析まで-80℃で保管した。 血清インターロイキン 6 および 16 濃度の分光光度測定は、Ray Biotech ELISA キット (RayBiotech Life, Inc.、ジョージア州、米国) を使用して行われました。

ゲノム DNA は、スピンカラム DNA 抽出キット (Jena Bioscience、ドイツ) を製造業者の指示に従って使用して、末梢血サンプルから単離されました。 DNA濃度は、Nanodrop分光光度計One（Thermo Scientific、米国）を使用して測定しました。 ジェノタイピング施設では、Qubit dsDNA 試薬と Qubit 4 分光光度計を使用して DNA 濃度を測定しました。 必要に応じて、同量のサンプル DNA を使用するとジェノタイピングがより適切に実行されるため、各サンプルを 10 ng/μL に希釈して調製しました。

4 つの一塩基多型の遺伝子型決定は、QuantStudio 5 リアルタイム PCR システム (Thermo Fisher Scientific、シンガポール) で TaqMan アッセイを使用して実行されました。 IL-16 遺伝子 (rs4072111 C/T、rs11556218 T/G、および rs4778889 C/T) および IL-6 遺伝子 (rs1800795C/G) の TaqMan® SNP ジェノタイピング用のプライマーおよびマスター ミックスは、Thermo Fisher Scientific から入手しました (表) 1)。

簡単に説明すると、TaqMan ジェノタイピング アッセイは 40X として提供され、実用的な 20X が準備され、メーカーの指示に従って分析が実行されます。 バックグラウンドを平衡化するための ROX を含む TaqPath ProAmp マスター ミックスを使用して、反復リアルタイム PCR 分析を実行しました。 TaqPath ProAmp マスター ミックス (12.5 μL)、実用的な 20X TaqMan アッセイ (1.25 μL)、サンプル DNA (10 ng) および PCRグレードの水。 各実行には 2 ～ 3 個のテンプレートなしのコントロールがありました。 ジェノタイピング PCR テンプレートを使用し、プリリード (60 °C で 30 秒) と変性/酵素活性化 (95 °C で 5 分間) の 2 つのホールド、40 サイクルの変性 (95 °C で 15 秒)、アニール/伸長 (60 °C で 60 秒) を行いました。 s)、最後にポストリードホールド (60°C で 30 秒)。 データ収集は、読み取り前、各サイクルの終了時、および読み取り後に行われました。 遺伝子型が分析され、対立遺伝子識別プロットから読み取られました。

遺伝的関連ケースのサンプルサイズ計算ツールを使用して、欠損データとその他の偶然性による20％の減少を考慮して、128人の参加者（グループあたり64人）のサンプルサイズにより、この研究の統計検出力は5％の有意水準で80％と推定されました。 –対照研究は、Mondry et al., 2006 [25] に記載されているように、http://osse.bii.a-star.edu.sg/calculation1.php からアクセスできます。

結果は、度数、パーセンテージ、平均±標準偏差として表示されます。 正規性の検定は Shapiro-Wilk 検定を使用して実行されました。 血清 IL-6 および IL-16 濃度は正規分布から逸脱しており、中央値 [四分位範囲] として表示されます。 平均としてまとめられた連続変数間の差異は独立したスチューデントの t 検定を使用して比較され、血清 IL-6 および IL-16 濃度は必要に応じてマン-ホイットニー U 検定またはクラスカル-ウォリス検定を使用して比較されました。 子宮内膜症患者と参照グループの頻度は、カイ二乗検定 (χ2) または線形相関によって比較されました。 オッズ比 (OR) および 95% 信頼区間 (95%CI) も計算されました。 すべての統計分析は、Windows および R ソフトウェア用の SPSS バージョン 27 を使用して実行され、p 値 < 0.05 が有意とみなされます。

健康な女性（32.8 ± 6.67 歳、25.3 ± 4.38 kg/m2）の平均年齢と BMI は、子宮内膜症患者（33.06 ± 6.78 歳、24.4 ± 4.19 kg/m2）と比較して有意ではありませんでした。 子宮内膜症の女性は、健康な女性と比較して、慢性骨盤痛、月経痛、性交痛、排便痛、排尿痛の頻度が有意に高かった（p < 0.0001）。 腹水があった女性は参照グループでは 1 人 (1.5%) のみだったのに対し、症例グループでは 22 人 (33.8%) でした。 胸水（16.9％）は症例群でのみ観察されました。 子宮内膜症の女性 35 人（53.8%）は骨盤内内膜症を患っていましたが、29 人（44.6%）と 1 人（1.5%）がそれぞれ骨盤外および骨盤/骨盤外両方の子宮内膜症を患っていました。 子宮内膜症の女性の大多数 (93.8%) には子宮内膜症の家族歴がありませんでしたが、3 人 (4.6%) が子宮内膜症の家族歴を報告しました。 子宮内膜症は、開腹術 (36.9%)、臨床像 (29.2%)、および腹腔鏡検査 (27.7%) によって診断されました。 その他は組織学 (3.1%) および開胸術 (3.1%) によって診断されました (表 2)。

2 つのグループ間で IL-6 または IL-16 血清濃度に統計的に有意な差はありませんでした。 参照グループの血清IL-6の中央値は7.61[5.81 – 12.78] pg/mlで、子宮内膜症の女性の7.07[5.84 – 9.67] pg/mlよりも高く、p値は0.175でした。 同様のパターンが、参照グループの血清 IL-16 中央値 23.17[16.39 – 45.99] pg/ml および症例 20.33[15.99 – 29.90] pg/ml グループで p 値 0.178 で観察されました (図 1)。 。

参照群および症例群における血清 IL-6 濃度および IL-16 濃度

子宮内膜症女性の疼痛スコアによる IL-6 血清濃度分布には統計的有意性はありませんでした。 IL-6 血清濃度の中央値は、軽度の痛みを報告した子宮内膜症女性では 6.5 [6.4 – 8.6]pg/ml、中等度の痛みを報告した女性では 7.1 [6.1 – 11.3]pg/ml、そして 7.1 [5.7 –激しい痛みのある人では9.3]pg/ml。

子宮内膜症の女性におけるIL-16血清分布は、軽度の痛みのある女性（16.0 [16.0 – 17.8]）pg/mlと比較して、重度の痛みのある女性（23.5 [17.1 – 32.0]）pg/mlの方が有意に高かった（p = 0.023）。 ml。 中等度の痛みを伴う女性の血清IL-16濃度(17.2[13.6-20.9])pg/mlは、軽度および重度の痛みを伴う女性と有意な差はありませんでした(図2)。

疼痛スコアに応じたIL-6およびIL-16の血清濃度

IL-6 (rs1800795) は、参照グループと症例グループの両方で単型性でした。 IL-16 で調査されたすべての多型はハーディ・ワインバーグ平衡にありました (p > 0.05)。 rs4778889のマイナー対立遺伝子頻度（MAF）は、参照群（31％）と比較して子宮内膜症の女性（45％）で有意に高かった（p=0.024）。オッズ比は1.80、95％信頼区間（CI）は1.08であった。 – 3.02。 また、劣性遺伝モデルを使用して、rs4778889 の遺伝子型頻度に統計的有意性 (p = 0.048) が観察され、ナイジェリア人女性の子宮内膜症における rs4778889-C 対立遺伝子の役割がさらに示唆されました。 rs11556218 と rs4072111 の遺伝子型と対立遺伝子の分布は類似しており、統計的有意性はありませんでした (p > 0.05) (表 3)。

観察された血清IL-16濃度は、参照グループと子宮内膜症患者の女性の両方において、IL-16遺伝子で調査された3つの多型（rs4778889、rs11556218、およびrs4072111）全体で同様でした（p > 0.05）（表4）。

血清IL-6およびIL-16濃度は、臨床症状に関係なく、子宮内膜症のすべての女性で同様でした（図3）。

子宮内膜症の種類に応じた IL-6 および IL-16 の血清濃度

表 5 は、疼痛スコアが IL-16 遺伝子で研究された多型と関連していないことを示しています (p > 0.05)。

子宮内膜症は免疫系に影響を与え、サイトカインなどの炎症誘発性因子を誘発します。 子宮内膜症の女性における IL-6 と IL-16 に関する研究には一貫性がありません。 子宮内膜症の女性の血清および腹水中のIL-6およびIL-16濃度の有意な上昇を報告した研究者もいるが、統計的有意性が見出されなかった研究者もいる[26、27、28、29]。 この研究では、子宮内膜症のある女性と子宮内膜症のない女性では、血清 IL-6 および IL-16 濃度に有意な差はありませんでした。 これまでの研究では、子宮内膜症の女性の血清IL-6濃度の上昇が報告されている[28、30、31]が、子宮内膜症における血清IL-6濃度の上昇を報告したイラン人女性を対象としたある研究では、子宮内膜症におけるIL-6の使用に有意な診断的価値を見出すことができなかった。子宮内膜症の女性を特定する[27]。

予想通り、この研究では、子宮内膜症の女性では痛みに関連した症状が最も一般的であり、罹患女性のほとんどが月経困難症や慢性骨盤痛を経験していることが判明しました。 これは、子宮内膜症の病因とその症状についてのさらなる理解を導くために、本研究で子宮内膜症患者の血清 IL-6 および IL-16 濃度と、IL-6 および IL-16 遺伝子多型の間の関連性を調査したことを説明しています。 もう 1 つの一般的な臨床症状は腹水で、通常は出血性であり、子宮内膜症症例の 3 分の 1 で報告されました。 この症状は文献ではあまり報告されていませんが、おそらく当センターが三次紹介センターであるため、当センターでは比較的頻繁に見られます。 系統的レビューでは、影響を受けた女性の63%がアフリカ系であることが判明した[32]。

重度の痛みを経験している子宮内膜症の女性は、IL-16 血清濃度が有意に高かったが、痛みの重症度と IL-6 血清濃度との間に関連性はなかった。 統計的有意性がないのは、各サブグループのサンプル サイズが小さいためである可能性があります。 より多くの子宮内膜症の女性集団を対象とした将来の研究では、この発見をさらに評価する必要があります。 IL-16 は炎症において重要な役割を果たしており [33]、痛みは炎症の特徴であり、これは子宮内膜症の女性の血清 IL-16 と痛みの重症度との間に観察される関連性を説明できる可能性があります。

IL16 遺伝子のプロモーター領域の rs4778889 (位置 -295 の T/C) は、遺伝子発現濃度の変化に関連しており、IL-16 濃度の増加の原因となっている可能性があります [34]。 Ganら[21]と同様に、我々はこの研究でrs4778889のC対立遺伝子が子宮内膜症と関連していることを観察し、IL-16遺伝子転写および血清IL-16濃度の上昇におけるC対立遺伝子の役割を示唆している。

rs11556218 は、エクソン 6 領域に位置するミスセンス エクソン SNP (T/G) であり、Pro-IL-16 の 446 位のアミノ酸変化 (アスパラギンからリジンへ) を引き起こし、タンパク質の構造と機能を変化させる可能性があります。 [9]。 私たちの発見に反して、IL-16 遺伝子の rs11556218 の G 対立遺伝子を持つギリシャ人とイラン人の女性は子宮内膜症のリスクが増加していました [7、35]。

rs4072111 は、IL-16 遺伝子のエクソン 6 に位置する別のミスセンス SNP (C/T: セリンからプロリン) です [9]。 私たちの研究では、子宮内膜症のギリシャ人や中国人の女性のように、rs4072111と子宮内膜症との関連性は見つかりませんでした[7、21]。 ただし、これは Azimzade らの研究とは異なります。 ここで、T対立遺伝子はイラン人女性における子宮内膜症のリスク増加を示した[35]。

IL-6 rs1800795 遺伝子型の分布は子宮内膜症とは関連しなかったが、CG 遺伝子型は子宮内膜症女性の血清 IL-6 濃度と有意に相関した [36]。 IL-6 の rs1800795 は今回の研究では単型性であり、イバダンのヨルバ族 (YRI) とエサン族 (ESN) の G 対立遺伝子頻度がそれぞれ 108 人および 99 人中 1.0 である 1000 ゲノムブラウザから得られたデータと一致しています。ナイジェリアの人口 [37]。 ガンら。 は、インターロイキン 6 遺伝子の「C」対立遺伝子の頻度の変動が、マレー人では 4.0%、インド人では 19.0%、マレーシアに住む中国人では 0.0% であると報告しました [38]。 他の集団と比較して、我々の被験者の間で見られるrs1800795の多型の欠如は、遺伝的多様性が疾患の感受性にどのように影響するかを強調しています。

子宮内膜症の根底にある遺伝子多型を解明するには、アフリカの女性を含む大規模な多施設研究が望ましい。

我々の結果は、ナイジェリア人女性において血清IL-16濃度の上昇が疼痛の重症度に関連し、IL-16 rs4778889の遺伝子多型が子宮内膜症に関連していることを明らかにした。 血清 IL-16 および IL-16 rs4778889 は、ナイジェリア人、ひいてはアフリカ人女性の子宮内膜症の重要なマーカーである可能性があります。 アフリカの子宮内膜症女性を対象とした大規模な多施設共同研究により、さらなる解明が得られるでしょう。

現在の研究中に生成および分析されたデータセットは一般に公開されていませんが、合理的な要求に応じて責任著者から入手できます。

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検体の保管に援助を与えてくださったナイジェリア鎌状赤血球財団 (SCFN) と、DNA ジェノタイピングのためにその DNA 研究室を使用する許可を与えてくださったナイジェリア、ラゴス州のナイジェリア医学研究研究所 (NIMR) に感謝します。

この研究は、ナイジェリア、ラゴス州ラゴス大学のオモロル・ムレレ助成賞（賞番号 VC/OA/L.09/Vol.3）の資金提供を受けました。

産婦人科学科、臨床科学部、医学部、大学、病院、PMB 12005、スルレレ、イディアラバ、ラゴス、ナイジェリア

[ダウンロード] をクリックして Ochuwa Adiketu Babah - Bosede Bukola mp3 youtube com を保存します

DNA 研究所、ナイジェリア鎌状赤血球財団、イディアラバ、ラゴス、ナイジェリア

オエソラ オイェウォル オジェウンミ

英国ロンドンのキングス・カレッジ癌・薬学学部

オエソラ オイェウォル オジェウンミ

ヒトウイルス学およびゲノミクスセンター、ナイジェリア医学研究所、ラゴス、ナイジェリア

チカ・キングスレー・オンウアマ

ラゴス大学医学部臨床科学部化学病理学部門/ラゴス大学教育病院、イディアラバ、ラゴス、ナイジェリア

イフェオマ クリスティアナ ウーデンゼ

ナイジェリア、ラゴス、ラゴス大学医学部、基礎医科学部生化学教室、分子生物学ユニット

アキニイ・アディラン・オスントキ

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OAB – 研究アイデアの概念化、参加者の募集、研究室分析、データ分析、出版用原稿の準備に携わります。 OOO — 研究アイデアの概念化、提案書の草案作成、データ分析、出版用の原稿の準備に携わります。 CKO — 遺伝子解析と出版用の原稿の準備に携わります。 ICU — 提案書の草案作成と出版用の原稿の準備に携わります。 AAO — 研究アイデアの概念化に関与し、研究の実施中および出版用の原稿のレビュー中に指導的な指導を提供しました。 BBA — 研究アイデアの概念化に関与し、研究の実施および出版用の原稿のレビュー中に指導的な指導を提供しました。 すべての著者が出版用の原稿を承認しました。

オチュワ・アディケトゥ・ババーへの通信。

実験プロトコルは、ラゴス大学教育病院保健研究倫理委員会によって承認されました (倫理承認番号: ADM/DCST/HREC/APP/2015)。 研究は承認されたプロトコルに従って実施されました。 この研究の実施中、ヒトを対象とした研究の倫理原則に関するヘルシンキ宣言の遵守が保証されました。 すべての参加者は、この研究への参加に関して自主的に決定を下すことができました。 この研究に参加した女性全員がインフォームドコンセントに署名しました。 参加者の情報の機密性は維持されました。

適用できない。

著者らは、競合する利害関係がないことを宣言します。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

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転載と許可

Babah, OA、Ojewunmi, OO、Onwuamah, CK 他 IL-16 の血清濃度とその遺伝子多型 rs4778889 は、ナイジェリア人女性の子宮内膜症の感受性と重症度に影響を与えます。 BMCウィメンズヘルス23、253（2023）。 https://doi.org/10.1186/s12905-023-02362-8

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受信日: 2022 年 8 月 13 日

受理日: 2023 年 4 月 15 日

公開日: 2023 年 5 月 11 日

DOI: https://doi.org/10.1186/s12905-023-02362-8

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